Ежегодно Справочная лаборатория по африканской чуме свиней (CISA—INIA, Мадрид, Испания, EURL) Европейского Союза (ЕС) организует проведение сличительных испытаний по диагностике АЧС для проверки компетенции и уровня подготовки специалистов диагностических лабораторий ЕС и других заинтересованных стран.
В 2019 году референтная лаборатория по АЧС подведомственного Россельхознадзору ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ID 45) пятый год подряд приняла участие в данных сличительных испытаниях. Для проведения исследований ФГБУ «ВНИИЗЖ» была получена панель шифрованных образцов, состоящая из 14 проб сыворотки крови от домашних свиней (S1-S14) и 6 проб патологического материала (T1-T6), для выявления антител и генома вируса АЧС, соответственно, с помощью используемых в лаборатории методов. Предоставленные пробы были отобраны от домашних свиней и диких кабанов с различной формой течения болезни (от острой до хронической), заражённых изолятами вируса АЧС, относящихся к различным генотипам (I, II, X) и отличающихся по степени вирулентности.
При проведении испытаний по выявлению генома вируса АЧС методом полимеразной цепной реакции сотрудники лаборатории использовали ПЦР в режиме реального времени (ARRIAH KIT), разработанную в референтной лаборатории ФГБУ «ВНИИЗЖ» в рамках выполнения НИР учреждения, и коммерческую тест-систему для диагностики АЧС методом ПЦР в режиме реального времени (Interlabservice ASF kit). Исследованию подлежали 14 образцов сыворотки и 6 образцов патологического материала от инфицированных и неинфицированных свиней (рис.1а и 1 b).
Рисунок 1а.
Примечание: POS – положительный результат; NEG – отрицательный результат; WEAK – слабоположительный результат.
Рисунок 1b.
Примечание: POS – положительный результат; NEG – отрицательный результат.
В результате ПЦР-исследований, проведённых специалистами ВНИИЗЖ, установлено, что в 4 пробах сыворотки крови (S5, S6, S10 и S11) и 4 пробах патологического материала (T1, T3, Т5 и Т6) присутствует геном (ДНК) вируса АЧС.
При исследовании сывороток крови методом иммуноферментного анализа (ИФА) использовали коммерческую тест-систему для выявления антител «Ingenasa K3» (пр-ль Ingenasa, Испания) и экспериментальную тест систему на основе комплексного антигена, разработанной в референтной лаборатории по АЧС ФГБУ «ВНИИЗЖ» (рис. 2а). Подтверждение результатов проводили рекомендованным МЭБ методом иммуноблотинга. (рис. 2b):
Рисунок 2а.
Примечание: POS – положительный результат; NEG – отрицательный результат
В результате исследований специалисты ВНИИЗЖ определили, что в 5 образцах сывороток (S3, S4, S5, S9 и S10) присутствуют специфические антитела к вирусу АЧС. Результаты иммуноблотинга, как наиболее высокоспецифичного и чувствительного метода, подтвердили эти результаты (рис. 2b).
Рисунок 2b.
Примечание: POS – положительный результат; NEG – отрицательный результат; WEAK – слабоположительный результат, doubt – сомнительный результат
Таким образом, специалисты референтной лаборатории по АЧС ФГБУ «ВНИИЗЖ» успешно прошли сличительные испытания, правильно определив общий результат для всех зашифрованных образцов (результаты подтверждены/расшифрованы EURL в Финальном отчёте) на основании комплекса различных методов исследований, используемых в лаборатории, тем самым подтвердив свою высокую методическую грамотность и квалификацию (рис 3).
Рисунок 3.
Примечание: POS – положительный результат; NEG – отрицательный результат; WEAK – слабоположительный результат
В своем финальном отчёте специалисты EURL высоко оценили квалификацию сотрудников, диагностические наборы и тест-системы, используемые для диагностики в референтной лаборатории по АЧС ФГБУ «ВНИИЗЖ»: «Для каждого зашифрованного образца был дан правильный результат, в соответствии с нашими ожиданиями. На основании данных результатов Справочная лаборатория ЕС установила, что диагностические процедуры, используемые в Вашей лаборатории соответствуют необходимому уровню для проведения диагностики полевого материала».
Положительные результаты, полученные при использовании в испытаниях экспериментальных тест-систем для диагностики африканской чумы свиней (ПЦР и ИФА), разработанных в ФГБУ «ВНИИЗЖ», подтвердили перспективность их внедрения в лабораторную практику ветеринарных учреждений Российской Федерации.
Пресс-служба ФГБУ «ВНИИЗЖ»
